蒸干溶剂( 赶酸) 过程蒸干溶剂( 盐酸) 是为了去除高浓度的盐酸,防止在上机时损坏仪器。关于蒸发去酸时的温度,标中有40 ~ 50 ℃和60 ℃的不同参考。有人认为, 70 ~ 80 ℃也是可行的。笔者在试验中采取了65 ℃,发现对试验结果无不良影响,适时提高温度可以加快蒸干速度,故在不影响氨基酸回收率的情况下,可选择相对较高的温度。
蒸干过程中可用氮吹仪或上海亚荣旋转蒸发仪,根据经验当每个样品只取少量( 如1 ml) ,很多样品时,可以选用氮吹仪; 当每个样品取样量比较多的时候,旋转蒸发仪较为合适。使用氮吹仪时,大概每1 ml 的样品量需要40 min 完全蒸干,如果取样量大,所需时间更长,且氮气消耗量很大,故不合适。当每次取样量比较多时( 如5 ml) ,选用上海亚荣RE-52AA型旋转蒸发仪,通常第个样品蒸干比较慢,主要是由于温度还没有升上去,随后的样品会越来越快,大概6 min 就可以完全蒸干( 仪器的不同性能状况其时间可能略有不同) ,连续做定量的样品时,会发现蒸干速度变慢,查看循环水真空泵内的循环水温度可能比较高,此时通过加些冰块降低温度,蒸干速度又会提上来。
缓冲液稀释过程样品经过蒸干后需用缓冲液稀释后才能上机,标中采用由定量的柠檬酸钠和浓盐酸配制而成pH 2. 2 缓冲液,这主要是与氨基酸分析仪所用到的柠檬酸钠缓冲液的体系有关。在具体应用中,氨基酸分析仪( 以日立公司为例) 有两套分析体系,套用柠檬酸钠缓冲液,另套用柠檬酸锂缓冲液,这样在用不同体系时即需配不同的缓冲液来稀释。在日常分析工作中,通常使用0. 02mol /L 盐酸来稀释,而实际中不少实验室都是采用这种方法。使用0. 02 mol /L 盐酸代替柠檬酸钠缓冲液使操作更简单方便。
前处理方法的选择
在实际应用中氨基酸分析中前处理有很多种,需要根据不同试验目的选用不同前处理方法,如何选择合适的前处理方法,以下几点可提供参考。
( 1) 氨基酸主要有两种存在形式,种是以结合态存在于肽和蛋白质中; 另种是以游离态存在于生理体液( 血浆和尿液) 、食品( 酒和饮料) 和药品中。测定第种类型的氨基酸,常用的是酸水解法,同时还有碱水解法和氧化水解法; 测定第二种类型的氨基酸,常用的是酸提取法( 0. 10 mol /L 盐酸或定浓度的磺基水杨酸) 。
( 2) 酸水解法能测定组成蛋白质的绝大多数氨基酸,但色氨酸会被完全破坏,含硫氨基酸会被部分破坏( 胱氨酸和蛋氨酸) ,天冬酰胺和谷氨酰胺会因不稳定转化为相应的酸被测定; 碱水解法般用来测定色氨酸; 氧化水解法可用来测定含硫氨基酸。
( 3) 般当测定与营养品质或蛋白质代谢相关的指标时,宜选用测定结合态的蛋白质的前处理方法; 般当测定与生长抗逆或酰胺类等游离氨基酸含量相关的指标时,宜选用测定游离氨基酸的前处理方法。
4 结语
酸水解是氨基酸分析中常用的种前处理方法。现今测定与蛋白质营养相关指标多是通过酸水解的前处理方法,适时改进和简化操作步骤,对于方便实际应用具有定的参考价值。该研究结合实践应用过程,提出了在具体操作过程中需注意的问题和可方便简化的步骤,相关工作人员在
实践中可尝试运用。